Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi, dan mengkarakterisasi bakteri asam laktat (BAL) dari isi usus halus ayam kampung (Gallus-gallus bankiva) yang memiliki potensi sebagai probiotik dalam rangka menemukan metode baru untuk meningkatkan produktivitas ayam pedaging. Penelitian eksploratif ini untuk isolasi BAL dari isi usus halus ayam kampung dan karakterisasi jenis spesies bakteri berdasarkan hasil pengamatan morfologi koloni, morfologi sel menggunakan metode pengecatan Gram, dan pengujian sifat-sifat bakteri dengan uji biokimia dan fisiologi yang meliputi: uji katalase, tipe fermentasi, dan uji kemampuan memproduksi asam laktat, dan uji ketahanan terhadap lingkungan asam. Data yang diperoleh dianalisis secara deskriptif dengan berpedoman pada Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology (Krieg & Holt, 1984). Penelitian eksploratif ini dilaksanakan di laboratorium Mikrobiologi Jurdik Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam (FMIPA), Universitas Negeri Yogyakarta (UNY). Hasil penelitian yang diperoleh membuktikan bahwa isolat bakteri dari isi usus ayam kampung dapat tumbuh pada media MRS CaCO3 membentuk zona jernih, Gram +. katalase -, dan dapat memfermentasi berbagai jenis monosakarida berdasarkan hasil isolasi dan karakterisasi tersebut maka dapat diidentifikasi bahwa isolat bakteri tersebut adalah bakteri asam laktat (BAL) genus Lactobacillus sp. Berdasarkan kemampuan hidup dan bertahan terhadap garam empedu, dan tahan terhadap lingkungan pH asam, maka dapat disimpulkan bahwa isolat bakteri tersebut merupakan bakteri kandidat probiotik